La base de la prueba de esterilidad en microbiología es la identificación de microorganismos vivos en un medio de cultivo que favorece el crecimiento de levaduras, hongos y bacterias, todos ellos presentes como contaminantes en los artículos estériles.
Es importante considerar que antes de realizar esta prueba de esterilidad cuente con los instrumentos de laboratorio de investigación científica adecuados.
Procedimiento
- Acreditación de las cualidades nutritivas del medio de cultivo
Inocular 1 mL de una suspensión que contenga 10-100 UFC/mL de cada cepa de microorganismo enumerada en una muestra representativa de cada medio estéril. Determinar el número de microorganismos inoculados contando el número de placas viables. Si el microbio crece claramente durante los siete días de incubación a la temperatura especificada, se considera que la prueba ha tenido éxito. Se puede incubar un número representativo de recipientes que contengan el medio durante siete días ciertas temperaturas.
- Encontrar los inhibidores microbiológicos
Averiguar si el producto contiene inhibidores microbianos antes de realizarle la prueba por primera vez. Los pasos para aplicar la técnica directa son los siguientes: hacer suspensiones de las cepas de los microorganismos que tengan 10-100 UFC/ml después de cultivarlas durante 24 horas. Poner un mililitro (ml) de cada suspensión producida en los tubos que contienen el medio de cultivo. Llenar la mitad de los tubos de ensayo con el medio de inoculación y añadir el producto. Durante al menos siete días, mantener los tubos en la incubadora a la temperatura adecuada.
Interpretación de resultados
A las horas señaladas, examine los tubos de ensayo. Si no hay signos de turbidez o desarrollo microbiológico, el producto satisface las normas de la prueba de esterilidad. En caso de que se detecte desarrollo microbiano, pero haya pruebas de contaminación inadvertida o tubos de control contaminados, la prueba deberá desestimarse y realizarse de nuevo utilizando un número igual de muestras.
Si observa alguna turbidez causada por el crecimiento microbiano y los tubos de control, superan la prueba, debe evaluar la morfología microscópica aplicando una tinción de Gram. La segunda prueba se invalida y se vuelve a realizar si, tras el periodo de incubación, no se observa crecimiento microbiano, pero está claro que se ha utilizado un procedimiento incorrecto.
